Lipopolisakkaritle İndüklenmiş Monoküleer Hücrelerde Timokinonun Proinflamatuar Sitokin Salınımına Etkisi

Abstract

Lipopolisaakrit (LPS)’ler, infeksiyonlar ve farklı yollarla dolaşım sistemine karışarak septik şok tablosuna yol açıp ölüme neden olabilir. Bu çalışmada Nigella sativa (çörek otu) tohumlarının ana bileşeni timokinonun LPS-ile indüklenen kan mononükleer hücreleri (MNH)’nde proinflamatuvar sitokin ekspresyonu üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Konsantrasyon-gradient santrifüj yöntemi ile 10 sağlıklı donörün kan örneklerinden MNH izole edildi. Hücreler, 4 saat boyunca LPS'ye maruz bırakıldı. 100 ng/ml LPS, 10-100 µM timokinon, 1 µM deksametazon ve bunların kombinasyonlarını içeren gruplar oluşturularak IL-1β, TNF-α, IFγ ve IL10 mRNA ekspresyonları RT-qPCR ve ELISA yöntemi kullanlarak analiz edildi. Timokinon tüm hücre gruplarında TNFα, IFγ ve IL-1β mRNA ekspresyonlarında ciddi azalmalara neden oldu. Antiinflamatuvar sitokin olan IL-10’un mRNA ekspresyonlarında ise LPS ile indüklenen gruplarda artış görüldü. Bunun aksine kısa süreli maruziyet sonrasında protein ekspresyonlarında değişiklikler anlamlı değildi. Bu çalışma, timokinonun proinflamatuvar sitokinlerin mRNA ekspresyonunu baskılayabileceğini ve IL-10 üzerinden antiinflamatuvar etkileri olabileceğini işaret etmektedir. Bununla beraber sitokin ekspresyonuna etkilerin uzun süreli maruziyet ya da in vivo modellerde teyit edilmesi gerekmektedir. Çalışmamız sepsis ve olasılıkla proinflamatuvar sitokinlerin etkin olduğu diğer inflamasyon durumlarında timokinon antiinflamatuvar ajan olma potansiyeli göstermektedir.

Lipopolysaccharides (LPS) can enter the systemic circulation through various infections, causing septic shock and death. In this study, it was aimed to investigate the effects of thymoquinone, the main component of Nigella sativa (Nigella sativa) seeds,on proinflammatory cytokine expression in LPS-induced blood mononuclear cells (MNC). MNCs were isolated from blood samples of 10 healthy donors by concentration gradient centrifugation method. Cells were exposed to LPS for four hours. Groups containing 100 ng/ml LPS, 10-100 µM thymoquinone, 1 µM dexamethasone and their combinations were formed and IL-1β, TNF-α, IFγ and IL10mRNA expressions were analyzed using RT-qPCR and ELISA method. Thymoquinone caused remarkable reduction in TNFα, IFγ and IL-1β mRNA expressions in all cell groups. The mRNA expressions of IL-10, an anti-inflammatory cytokine, were increased in LPS-induced groups. In contrast, changes in protein expressions were not significant after short-term exposure. This study indicates that thymoquinone can suppress mRNA expression of proinflammatory cytokines and may have anti-inflammatory effects on IL-10. However, effects on cytokine expression need to be confirmed in long-term exposure and in vivo models. Our study shows the potential for thymoquinone to be an anti-inflammatory agent in sepsis and possibly other inflammation conditions where proinflammatory cytokines are active.